Proiect CEEX 92/2006

Director de proiect: Dr. Gabriela Nicolescu

 

Titlul proiectului: Investigarea trans-disciplinara sanatate-mediu a re-emergentei circulatiei virusului West Nile in conditiile schimbarilor de mediu din Romania si elaborarea strategiei de control al infectiilor.

 

Acronim: ECO-WN  

 

Parteneri
Institutul National de Cercetare-Dezvoltare pentru Microbiologie si Imunologie “Cantacuzino” (IC) – promotorul proiectului prin grupul sau de cercetare in domeniul entomologiei medicale, implicat in investigarea ecologica si supravegherea bolilor transmise de artropode.
Universitatea din Bucuresti (UB) – Centrul de Servicii Ecologice (CESEC) pentru caracterizarea ecosistemelor si detectia schimbarilor de mediu.  
Agentia Spatiala Romana (ASR) – pentru aplicarea tehnologiilor spatiale (Teledetectie din sateliti si GIS) in epidemiologie.
Administratia Nationala de Meteorologie (ANM) – factorii climatici care influenteaza emergenta bolilor transmise de vectori
Centre de Cercetari Stiintifice Medico-Militare (CCSMM) – Laboratorul de Virusologie implicat in investigarea arbovirusurilor.
Universitatea de Medicina si Farmacie “Victor Babes”– Timisoara – Laboratorul de Parazitologie pentru investigarea vectorilor locali (tantari si capuse)
Universitatea de Stiinte Agricole si Medicina Veterinara a Banatului – Timisoara – echipa care investigheaza gazdele vertebrate locale ale virusului West Nile.
Directia Sanitara Veterinara si pentru Siguranta Alimentelor – Municipiul Bucuresti – echipa care investigheaza gazdele vertebrate locale ale virusului West Nile.
Directia Sanitara Veterinara si pentru Siguranta Alimentelor – Tulcea – echipa care investigheaza gazdele vertebrate locale ale virusului West Nile.

 

Obiectivele principale ale proiectului sunt:
Imbunatatirea cunostintelor asupra proceselor epidemiologice legate de emergenta si raspandirea unei boli transmise de tantari (infectiile cu virusul West Nile), care este o importanta problema de sanatate publica in actualele schimbari de mediu din Romania;
Dezvoltarea metodelor si a metodologiilor necesare pentru elaborarea modelelor de prognoza a emergentei si raspandirii infectiilor cu VWN.  

Aceste obiective sunt conforme cu cele din aria tematica 6.3. din PC 7 “Global change and Ecosystems” care include sectiunea integrativa “Mediul si sanatatea”.

Inovatiile proiectului se concretizeaza in integrarea pentru prima data a investigatiilor sanatate-mediu si utilizarea datelor spatiale obtinute prin tehnologii spatiale (teledetectie din sateliti si GIS) cu datele epidemiologice.

Proiectul implica investigatii multidisciplinare pentru a atinge urmatoarele obiective subiacente:
Caracterizarea potentialilor vectori, gazde si rezervoare probabile de a integra, perpetua sau raspandi VWN in ciclurile de transmitere din diferite ecosisteme.
Identificarea, evaluarea si catalogarea ecosistemelor la risc in Romania pentru emergenta infectiilor cu VWN.
Identificarea conditiilor de mediu legate de efectele schimbarilor globale si locale, care pot influenta distributia spatiala si temporala si dinamica VWN.
Dezvoltarea, evaluarea si selectarea tehnicilor si metodologiilor necesare pentru introducerea in strategiile de supraveghere si control al acestor infectii.
 

Prin realizarea acestor obiective se va atinge scopul final al proiectului si anume elaborarea modelelor de circulatie si a strategiilor de avertizare timpurie, monitorizare si control al infectiilor cu VWN in ecosistemele naturale si antropice, atat urbane cat si rurale, din Romania.

 

Etapa I (conform planului de realizare a proiectului) (01.08.2006 – 10.12.2006): „Caracterizarea ecosistemelor şi a habitatelor studiate în corelaţie cu datele istorice privind schimbările climatice şi alte schimbări de mediu şi cu circulaţia VWN. Investigaţii preliminare asupra ciclurilor de transmitere a VWN în diferite tipuri de ecosisteme din România”.

S-a realizat descrierea ecosistemelor şi habitatelor din zonele de studiu: Zona metropolitană Bucureşti, Rezervatia biosferei Delta Dunării si zona de stepa din  judeţul Tulcea si zona Banatului.

S-au evaluat schimbările climatice si alte schimbari de mediu în timp şi spaţiu în zonele studiate prin analiza datelor climatice pe perioada 1961-1990 si a datelor geografice, geologice, pedologice, hidrologice, tipuri de habitate si biodiversitatea ca si date legate de populatia umana din zonele respective in corelatie cu datele istorice privind circulaţia VWN. 

S-au selectat şi implementat tehnicile de lucru entomologice, ecologice, virusologice, imunologice, moleculare si pentru prima data tehnicile spatiale de teledetectie si GIS de interpretare a datelor epidemiologice de circulatie a VWN.

S-au abordat investigatiile de teren si laborator asupra ciclurilor de transmitere a VWN incluzand pasari domestice si salbatice (gazdele principale ale VWN), cai (gazde tangentiale) si culicidele vectoare.

 

Etapa II: (11.12.2006 – 31.03.2007): “Integrarea si evaluarea datelor preliminare privind ciclurile de transmitere a VWN obtinute in primul an de studii cu datele istorice privind circulatia sa si schimbarile de mediu”.

 

S-a realizat prelucrarea, evaluarea si integrarea tuturor datelor preliminare obtinute in primul an de studii in teren cu datele istorice privind circulatia VWN si schimbarile de mediu. S-a constatat circulatia enzootica permanenta si pe teritorii extrem de intinse in toate zonele de studiu a VWN chiar in conditii climatice mai putin favorabile pentru populatiile de vectori si deci riscul de aparitie a imbolnavirilor la om, în contextul extinderii şi intensificării fără precedent a circulaţiei acestui virus pe plan global.

 

 

Etapa III. (01.04.2007 – 30.11.2007): “Investigatii complexe asupra ciclurilor de transmitere a VWN in diferite tipuri de ecosisteme din Romania si integrarea cu datele de caracterizare si evolutie a factorilor de mediu”.

 

In aceasta etapa s-au realizat investigatii de teren si laborator asupra ciclurilor de transmitere a VWN pe tot parcursul sezonului cald si al prezentei active a culicidelor.

Pentru prima data s-a realizat detectia VWN in culicide cu sistemul RAMP (Rapid Analyte Measurement Platform) adecvat si testarii rapide in teren si s-au obtinut trei izolate de VWN. Investigatiile au confirmat permanenta circulatiei enzootice a virusului pe teritorii extrem de intinse in Romania a carei intensitate s-a corelat cu evolutia factorilor de mediu in timp si spatiu in diferite ecosisteme.

 

 

Etapa IV. (01.12.2007 – 31.03.2008): “Evaluarea datelor  privind ciclurile de transmitere a VWN obtinute in cadrul proiectului si elaborarea modelelor de circulatie a virusului in conditiile de mediu specifice zonelor de risc din Romania”.

 

S-a realizat prelucrarea si evaluarea datelor obtinute in cadrul proiectului si coroborarea acestora cu datele istorice privind circulatia VWN si cu datele de mediu atat istorice cat si actuale. S-au  elaborat modelele de circulatie a virusului in conditiile de mediu specifice zonelor de risc din Romania, incluzand atat ecosistemele naturale cat si cele antropice (rurale si urbane). Ele stau la baza elaborarii strategiilor de avertizare timpurie, prevenire si control al infectiilor umane produse de acest virus.

 

Etapa V (01.04.2008 – 15.09.2008): “Evaluarea modelelor propuse de circulatie a VWN in diferite ecosisteme si elaborarea strategiilor de avertizare timpurie, de supraveghere si control al infectiilor”

 

In aceasta ultima etapa s-au completat investigatiile de teren si laborator asupra ciclurilor de transmitere a VWN si s-a trecut la evaluarea incadrarii datelor obtinute din aceste investigatii in modelele de circulatie a VWN elaborate anterior pentru diferite tipuri de ecosisteme, obtinandu-se definitivarea acestor modele.

S-au elaborat strategiile de avertizare timpurie, monitorizare si control al infectiilor cu VWN, care pe langa monitorizarea cazurilor umane are ca directie esentiala monitorizarea ecologica a circulatiei virale (in gazdele vertebrate si mai ales in vectori) in corelatie cu evolutia factorilor de mediu, cu scopul prognozarii nivelului de risc si limitarii acestuia. S-au selectat tehnicile si metodele utilizabile in cadrul strategiilor de monitorizare si control. S-au realizat harti incluzand zonele de circulatie a VWN in Romania.

 

 

Proiectul CEEX 92 / 2006 realizat de catre partenerii mentionati, a inclus si s-a finalizat prin:

- Studii complexe, multidisciplinare, asupra componentelor ciclurilor de transmitere a virusului West Nile (culicide vectoare; gazde principale – pasari domestice si salbatice; gazde tangentiale – cai), in tipurile specifice de ecosisteme naturale si antropice din Romania, in corelatie cu evolutia conditiilor climatice. 

- Elaborarea modelelor de circulatie a virusului West Nile in ecosistemele naturale si antropice, atat urbane cat si rurale, din Romania, care stau la baza realizarii si aplicarii strategiilor de monitorizare si control pentru limitarea infectiilor la om.

- Elaborarea strategiilor de avertizare timpurie, monitorizare si control al infectiilor cu virusul West Nile, aliniate la modalitatile actuale de control al acestor infectii pe plan international si incadrate in normele europene, care vor fi utilizate de catre reteaua de supraveghere a bolilor transmise de vectori din Romania de la nivelul Autoritatilor de Sanatate Publica judetene, retea care trebuie reconstituita pentru a putea fi  integrata in reteaua europeana de supraveghere. Strategiile de supraveghere si control includ tehnicile si procedurile de monitorizare actuale de ultima ora pe plan international, utilizate de noi in timpul investigatiilor. Strategiile au ca fundament modalitatile de actiune proactiva, pentru asigurarea avertizarilor si aplicarea masurilor preventive, intre acestea pe primul loc situandu-se monitorizarea permanenta a populatiilor de culicide vectoare si aplicarea masurilor de combatere a acestora. Prin aceste activitati se realizeaza limitarea pana la eliminare a posibilitatilor de aparitie a infectiilor la om.

- Elaborarea hartilor cu zonele de circulatie a virusului West Nile in Romania (pe baza tehnicilor de teledetectie satelitara si GIS), in care s-au inregistrat cazurile de infectii umane, prezenta anticorpilor fata de acest virus la gazdele vertebrate, prezenta virusului in culicidele vectoare, acestea reprezentand zonele de risc principale din Romania pentru aparitia infectiilor la om. 

 

 

Diseminarea pana in prezent a rezultatelor obtinute in acest proiect:

 

Carti (Books):   

 

Purcarea-Ciulacu V. Virusul West Nile in Romania. ISBN 978-973-556-365-1, Editura Ars Docendi, 2008

 

Ciolpan O., Nicolescu G., Vladimirescu Al., Coipan E.C. Artropodele, vectori pentru agentii patogeni. ISBN 978-973-558-371-2, Editura Ars Docendi, 2008

 

Alte publicatii (Other publications):

 

Prioteasa L., Falcuta E. (2007). Mosquitoes (Diptera: Culicidae) in  Mila 26 – Maliuc area (Danube Delta, Romania). Scientific Annals of Danube Delta National Institute, 13: 89-96

 

Popescu D., Necsulescu M., Alexse A., Purcarea-Ciulacu V., Ionescu L., Bicheru S., Ordeanu P., Dumitrescu G. and Nicolescu G. (2008). West Nile virus infections of horses in anthropic ecosystems in Romania [Infectii cu virusul West Nile la cabaline in ecosistemele antropice din Romania]. Revista Romana de Medicina Veterinara, vol. 2, in curs de aparitie

 

Prioteasa L., Falcuta E., Reiter P., Nicolescu G. (2008). A preliminary pattern about West Nile virus transmission in the Danube Delta Scientific Annals of Danube Delta National Institute, Vol. 14, in curs de aparitie

 

Falcuta E., Prioteasa L., Nicolescu G. (2008). Investigation of the Anophelinae (Diptera: Culicidae) fauna in three different ecosystems of the Danube Delta Biosphere Reserve and their role as vectors. Scientific Annals of Danube Delta National Institute, Vol. 14 in curs de aparitie

 

Lucrari prezentate la conferinte internationale (papers presented at international conferences):

 

Rimbu N., Boroneant C., Dima M., Stanciu A. (2006). Seasonal forecast of Danube river flow anomalies based on its stable tele-connections with the global surface temperature and precipitation fields. 1st International Conference on Climate Change and the Middle East: Past, present and future. November 2006, Vienna, Austria

 

Prioteasa F. (2007). Results of the investigation on mosquito fauna in the Danube Delta in 2006. EDEN Annual Meeting, January 2007, Antalya

 

Nicolescu G., Purcarea-Ciulacu V., Popescu D., Dumitrescu G., Vladimirescu A., Prioteasa L., Coipan E.C., Ionescu L. and Alexse A. (2007). The Ecological Surveillance of West Nile Virus Circulation in Romania (2001 – 2006), IMED 2007 – International Meeting on Emerging Diseases and Surveillance, Vienna, Austria, 23 – 25 February 2007, 126

 

Ceianu C.S., Serban R., Ungureanu-Alexse A., Nicolescu G., Popovici F., Pitigoi D., Popescu D., Panculescu R.I., Cernescu C., Tardei G., Ionescu L., Nedelcu N.I. (2007). West Nile virus: A Decade (1997-2006) of Laboratory Based Surveillance in Romania. IMED 2007 – International Meeting on Emerging Diseases and Surveillance, Vienna, Austria, 23 – 25 February 2007, 119

 

Nicolescu G., Purcarea-Ciulacu V., Popescu D., Dumitrescu G., Vladimirescu A., Prioteasa L., Coipan E.C., Ionescu L., Kiss J.B., Marinov M., Alexse A. (2007). Studies on West Nile virus circulation in Romania. The 4^th European Meeting on Viral Zoonoses, 2^nd – 5^th June 2007, St. Andrews, Scotland, UK, 16

 

Boroneant C., Baciu M., Orzan A., Cheval S., Manea A. (2007). Synthesis of the results on the intercomparison between meteorological parameters provided by the automatic and classical stations in Romania. The 6th ECSN (European Climater Support Network) Data Management Workshop, Vienna, Austria, November 2007

 

Orzan A., Toma E. (2007). The Romanian Climatological Database: Description of web catalogue. The 6th ECSN (European Climater Support Network) Data Management Workshop, Vienna, Austria, November 2007

 

Dumitrescu A., Cheval S., Manea A. (2007). Data range influence on mapping mean precipitation. The 6th ECSN (European Climater Support Network) Data Management Workshop, Vienna, Austria, November 2007

 

Baltesiu-Mitrache L., Mihai D., Mudura R., Nicolescu G. (2007). The West Nile virus circulation in Romania – the risk areas. The International Conference and Meeting of the Central and Eastern European Chapter of the International Society for Environmental Epidemiology (CEEC ISEE), Ostrava, Czech Republic, November 2007

 

Nicolescu G., Purcarea-Ciulacu V., Popescu D., Dumitrescu G., Vladimirescu A., Prioteasa L., Coipan E.C., Ionescu L., Alexse A. (2007). Investigation of West Nile virus circulation in Romania. The Second International Conference of Economic Entomology, Cairo, December 2007, 119

 

Purcarea-Ciulacu V., Alexse A., Prioteasa L., Falcuta E., Coipan E.C., Vladimirescu Al., Popescu D., Dumitrescu G. and Nicolescu G. (2008). The transmission cycles of West Nile virus in Romania. EDEN Meeting, Emerging Diseases in the Changing European Environment, Brno, Czech Republic, January 2008

 

Prioteasa L., Falcuta E., Reiter P. and Nicolescu G. (2008). Ornithophilic mosquitoes (Diptera: Culicidae) in the Danube Delta biosphere reserve and their possible role in the transmission of West Nile virus (Flaviviridae). EDEN Meeting, Emerging Diseases in the Changing European Environment, Brno, Czech Republic, January 2008

 

Colfescu I., Boroneant C., Manea A. (2008). Multivariate techniques for identification the atmospheric circulation patterns associated to heavy precipitation in Romania. Working Group (WG3) of the COST 733 Action, Barcelona, Spain, February 2008.

 

Colfescu I., Boroneant C.; Esteban P., Martin-Vide J. (2008). Classification of atmospheric circulation patterns associated to heavy precipitation in Romania. European Geosciences Union General Assembly 2008, Vienna, Austria, April 2008.

 

Boroneant C., Colfescu I., Caian M. (2008). Cluster analysis of air mass trajectories reaching south of Romania. European Geosciences Union General Assembly 2008, Vienna, Austria, April 2008.

 

Manea A., Dumitrescu A., Raliţă I., Boroneanţ C. (2008). Ice deposit trends in Romania in relation with climate change. European Geosciences Union General Assembly 2008, Vienna, Austria, April 2008.

 

Manea A., Oprea C., Boroneanţ C. (2008). Comparison between classical and automatic measurements of solar radiation performed at the meteorological stations in Romania: preliminary results. European Geosciences Union General Assembly 2008, Vienna, Austria, April 2008.

 

Purcarea-Ciulacu V., Alexse A., Prioteasa L., Falcuta E., Coipan E.C., Vladimirescu Al., Popescu D., Dumitrescu G. and Nicolescu G. (2008). Detection of West Nile virus in the components of its transmission cycles in Romania. The 13^th International Congress on Infectious Diseases (ICID), Kuala Lumpur, Malaysia, June 2008

 

Nicolescu G., Purcarea-Ciulacu V., Vladimirescu A., Prioteasa L., Falcuta E., Coipan E.C., Dumitrescu G., Popescu D. and Alexse A. (2008). Evaluation of the re-emergence risk of mosquito-borne diseases in Romania. The 23rd International Congress of Entomology, Durban, South Africa, July 2008

 

Ciolpan O., Nicolescu G., Coipan E.C. and Vladimirescu A. (2008). The importance of permanent monitoring of vector mosquito populations for their control in Romania. The 23rd International Congress of Entomology, Durban, South Africa, July 2008

 

Nicolescu G., Purcarea-Ciulacu V., Prioteasa L., Vladimirescu A., Falcuta E., Coipan E.C., Dumitrescu G., Popescu D., Ionescu L., Bicheru S., Kiss J.B., Marinov M. and Alexse A. (2009). West Nile virus in Romania. EDEN Annual Meeting, Marrakech, Morroco, January 2009

 

 

Lucrari prezentate la conferinte nationale cu participare internationala (Papers presented at national conferences with scientific committee and international participation)

 

Nicolescu G., Alexse A., Purcarea-Ciulacu V., Vladimirescu A., Coipan E.C., Prioteasa L., Falcuta E. (2007). Probleme actuale privind supravegherea bolilor transmise prin vectori in Romania. A XI-a Reuniune Anuala de Microbiologie, 24 – 26 mai, Mamaia, 24 – 25

 

Purcarea-Ciulacu V., Alexse A., Popescu D., Dumitrescu G., Prioteasa L., Falcuta E., Kiss J.B., Marinov M., Raileanu S., Ionescu L., Bicheru S., Nicolescu G. (2007). Implicarea gazdelor vertebrate in ciclurile de transmitere a virusului West Nile. A XI-a Reuniune Anuala de Microbiologie, 24 – 26 mai, Mamaia, 62 – 63

 

Popescu D., Necsulescu M., Alexse A., Purcarea-Ciulacu V., Ionescu L., Bicheru S., Dumitrescu G., Kiss J.B., Marinov M., Nicolescu G., Postoarca A. (2007). West Nile virus infection in horses in the anthropic ecosystems in Romania. Al X-lea Congres National de Medicina Veterinara, 18 – 21 septembrie 2007, Poiana Brasov, Romania, 21 – 22

 

Prioteasa L., Falcuta E., Reiter P., Nicolescu G. (2007). Investigatii asupra faunei de tantari (Diptera: Culicidae) din Rezervatia Biosferei Delta Dunarii in vederea stabilirii speciilor vectoare pentru virusul West Nile (Flaviviridae). Conferinta Nationala de Parazitologie, 8 – 10 noiembrie 2007, Constanta. Revista Română de Parazitologie, vol. XVII, supliment, 152

 

Nicolescu G., Ungureanu-Alexse A., Purcarea-Ciulacu V., Vladimirescu Al., Coipan E.C., Prioteasa L., Falcuta E. (2007). Supravegherea ecologica pentru prevenirea si controlul bolilor transmise prin vectori. Conferinta Nationala de Sanatate Publica cu participare internationala “Oportunitati si provocari in sanatatea publica, in contextul integrarii Romaniei in Uniunea Europeana”. 16-18 noiembrie 2007, Timisoara, Romania, 61

 

Prioteasa L., Falcuta E., Reiter P., Nicolescu G. (2008). A preliminary pattern about West Nile virus transmission in the Danube Delta. The 18^th Symposium “Deltas and Wetlands”, Tulcea, Romania, September 2008

 

Baltesiu L., Mudura R., Mihai D., Purcarea-Ciulacu V. and Nicolescu G. (2008). GIS – a tool for monitoring and management of epidemics. The 17^th National Conference of Parasitology, Cluj-Napoca, November 2008. Romanian Journal of Parasitology, XVIII, Supplement, 11

 

Ciolpan O., Nicolescu G., Coipan E.C. and Vladimirescu A. (2008). The importance of permanent monitoring of vector mosquito populations for their control in Romania. The 17^th National Conference of Parasitology, Cluj-Napoca, November 2008. Romanian Journal of Parasitology, XVIII, Supplement, 46

 

Nicolescu G., Purcarea-Ciulacu V., Vladimirescu A., Prioteasa L., Falcuta E., Coipan E.C., Dumitrescu G., Popescu D. and Alexse A. (2008). Evaluation of the re-emergence risk of mosquito-borne diseases in Romania. The 17^th National Conference of Parasitology, Cluj-Napoca, November 2008. Romanian Journal of Parasitology, XVIII, Supplement, 160

 

Purcarea-Ciulacu, V., Alexse A., Prioteasa L., Falcuta E., Coipan E.C., Vladimirescu A., Popescu D., Dumitrescu G. and Nicolescu G. (2008). The transmission cycles of West Nile virus in Romania and the detection of virus presence. The 17^th National Conference of Parasitology, Cluj-Napoca, November 2008. Romanian Journal of Parasitology, XVIII, Supplement, 200

 

 

 Proiect CEEX 83/2006

Director: Dr. Adrian ONU

Tehnologii celulare pentru producerea de vaccinuri

Acronim: CELLVACC

 

Colaboratorii proiectului:

 

·         Promotorul – INCDMI „Cantacuzino” (IC) – cu competente in cercetarea si producţia de vaccinuri de uz uman in România) – a participat cu echipe de cercetare cuprinzând producători de vaccinuri şi unităţi de control cu experienţă în producerea de vaccinuri pe culturi primare (fibroblaste de pui şi ouă embrionate).

·         Universitatea din Bucureşti (UNIBUC) – a participat cu experţi in biologie celulara care sunt in in acela timp si cadre universitare fiind astfel implicati si in formarea de specialişti.

·         Institutul de Biochimie al Academiei Române (IBAR) cu rezultate ştiinţifice importante in biochimie în special în analiza structurilor glicoproteice.

 

Principalele obiective ale proiectului au fost:

 

Îmbunătăţirea biotehnologiilor de preparare a unor vaccinuri, in fabricaţie la INCD (Institutul Naţional de Cercetare-dezvoltare) pentru Microbiologie si Imunologie „Cantacuzino” şi crearea unui cadru de lucru pentru introducerea de noi vaccinuri bazate pe tehnologii celulare ;

·          Crearea unei expertize naţionale cadru de pentru producerea de vaccinuri şi alte produse biofarmaceutice de biosinteză care se bazează pe tehnologii de culturi celulare bazate pe concepte moderne de din domeniul biotehnologiei;

·         Crearea unui sistem de instruire in domeniul tehnologiilor moderne de culturi celulare in scopul Proiectarea unor scheme si procese pentru obţinerea de noi bioproduse in scop comercial;

·         Elaborarea şi validarea de metode de control ale producerii de vaccinuri pe baza biotehnologiilor celulare moderne. Urmând conceptele de europene GMP („Good Manufacturing Practice” – Reguli de Buna Practica de Fabricaţie) pentru produse obţinute pe culturi de celule diploide.

  

Prin activităţile ce se vor desfăşura, programul de cercetare s-a caracterizeazat printr-un un grad înalt de complexitate, datorita cerinţelor de a aplica tehnologii avansate care vor permite înlocuirea proceselor tradiţionale cu procese de producţie ce îmbunătăţesc siguranţa reduc riscurile de dependenţă de acest material ca in cazul unei pademii de gripă. Succesul proiectului se bazează pe capacitatea integrării cercetării, dezvoltării cu învăţământul universitar în scopul realizării lui a fost creat un parteneriat dintr-un grup de specialişti înaltă competenţa provenind din laboratoare cu dotare şi experienţă corespunzătoare, astfel:

  

 

REZUMATUL REZULTATELOR PROIECTULUI

 

    Proiectul „Tenologii celulare pentru producerea de vaccinuri” a avut ca obiectiv principal îmbunătăţirea biotehnologiilor de preparare a unor vaccinuri, actualmente în fabricaţie pe culturi primare (fibroblaşti de pui şi ouă embrionate) folosind ca alternativă linii celulare stabilizate dar şi crearea unui cadru de lucru pentru introducerea de noi vaccinuri bazate pe tehnologii celulare.

   Proiectul a fost realizat de către Institutul Naţional de Cercetare-dezvoltare pentru Microbiologie şi Imunologie „Cantacuzino” în colaborare Universitatea din Bucureşti şi Institutul de Biochimie al Academiei Române bazându-se pe echipe de specialişti cu competenţe în cercetarea şi producţia de vaccinuri de uz uman, control al produselor biologice, biologia celulară şi biologia moleculară a virusurilor. Întreg conceptul proiectului a a fost bazat pe cel de integrare între cercetare şi învăţământ, componenta universitară, dincolo de competenţa în cercetare, având rol în dezvoltarea pe termen lung a bazei de specialişti prin activităţi de formare profesională.

    Proiectul a avut ca obiective principalele elaborarea unui model de lucru pentru producerea de vaccinuri virale pe culturi celulare. Aceasta a constat în alegerea liniilor celulare precum şi a modului de adaptare a  acestora pe variante de medii sintetice sau semisintetice în culturi staţionare. A urmat studiul experimental al multiplicării virale in diferite condiţii ca premiză a producerii de vaccinuri virale pe culturi celulare. Transferul rezultatelor pe sisteme de mai mare productivitate a impus in multe dintre cazuri reluarea optimizării din fazele anterioare. În final elaborarea de documente de reglementare privind producerea vaccinurilor virale pe culturi celulare, ca ansamblu de proceduri operaţionale standard, a creat premizele proiectării unui ansamblu tehnologic şi testării acestuia într-o faza ulterioară.

    În întreg ansamblul proiectului s-a urmărit introducerea de medii de cultură fără adausuri provenite de la animale.  În sistemul tradiţional, pentru cultivarea celulelor primare sau a liniilor celulare se utilizează medii clasice conţinând aminoacizi, vitamine, săruri anorganice şi glucoză, ca sursă de carbon. Pentru a susţine creşterea celulelor, aceste medii au necesitat o suplimentare cu ser animal, de obicei ser foetal bovin, în concentraţii cuprinse între 5 şi 20%. Serul furnizează factori de creştere, substanţe nutritive pentru proliferare şi diferenţiere, proteaze şi factori de ataşare. În afară de aceasta, serul reglează şi permeabilitatea membranei celulare şi serveşte ca purtător pentru lipide, enzime, şi elemente rare. Serul considerat necesar pentru creşterea şi proliferarea majorităţii liniilor celulare prezintă unele inconveniente ce necesită regândirea utilizării sale. Este vorba de costul crescut, variabilitatea de la un lot la altul, posibilitatea contaminării cu agenţi adventiţiali, conţinutul crescut de proteine care poate influenţa negativ culturile celulare.

    Ca urmare proiectul a urmat tendinţa modernă de înlocuire a mediilor clasice care conţin diferite concentraţii de ser foetal bovin cu medii sintetice sau medii definite chimic, cu conţinut redus de ser, medii complet lipsite de ser sau de proteine, medii definite chimic. Adaptarea celulelor de mamifere la cultivarea în medii fără ser a fost realizată prin diferite metode,  metoda trecerii treptate la medii fără ser, metoda adaptării directe la medii fără ser, urmărind comportamentul celulelor în cultura: creştere, metabolism, morfologie, cinetica creşterii liniilor celulare stabilizate, evidenţierea modificărilor morfologice ale liniilor celulare MDCK şi Vero, modificări morfologice, evaluarea metabolismului celular pe parcursul adaptării  testarea stabilităţii la adaptarea directă.

    Pentru experimentarea condiţiilor de creştere a virusurilor de interes au fost folosite ca modele de lucru celulele Vero pentru  modelul virusului rujeolos şi MDCK pentru cele ale viruslui gripal. Cu privire la propagarea virusului rujeolos s-a evidenţiat  o bună concordanţă a rezultatelor obţinute prin examinarea microscopică cu cele privind determinarea gradului de liză membranară, metoda diluţiilor zecimale rezultatele examinării microscopice fiind confirmate de metoda eliberării LDH, metodă rapidă, sensibilă,  şi cu un cost redus.

    Tulpinile vaccinale de virus gripal au fost capabile să infecteze comparabil substratul celular MDCK (cultivat pe cele două tipuri de medii cu si fără ser).

    Ca metodă de control, secvenţierea demonstrează o omologie perfectă între tulpinile de virus gripal multiplicate în ou embrionat şi cultură celulară. In plus analiza glicolizlării proteinelor din anvelopa virusului gripal poate evidenţia posibilele diferenţe de glicolizare între virusurile provenite din diferite surse.

    Producerea rapida de masă celulară devine şi mai importantă în situaţii în care substratele clasice pot lipsi ca de exemplu dezvoltarea de vaccin pentru situaţii de pandemie cu virus aviar. Pentru acesta au fost comparate sisteme de cultivare în rotator (roller) direct sau pe microcarrier în prezenta de medii cu ser de viţel sau cu conţinut redus de ser. În prezenţa serului de viţel atât în sistem staţionar cat şi pe roller au fost obţinute rezultatele aşteptate. În mediul fără ser sau cu concentraţie redusă de ser cultivarea în roller limitează proliferarea celulară, comparativ cu sistemul staţionar. În plus, se înregistrează o activitate dehidrogenazică scăzută şi un indice LDH/MTS foarte mare. Cultivarea pe microcarrier, în sisteme staţionare, în condiţiile experimentale date, este corelată cu o activitate dehidrogenazică moderată, dar oferă avantajul limitării lizei membranare (se înregistrează un indice LDH/MTS moderat).

    Cu privire la producerea de virus gripal obiectivele acestei etape au fost de a experimenta diferite condiţii de creştere a virusurilor gripale şi de a verifica stabilitatea lor genetică. În acest sens, s-a urmărit stabilirea concentraţiei de tripsină necesară virusului gripal ca, după ataşarea la receptorul celular să pătrundă în celulă, creşterea capacităţii de replicare a unei tulpini de virus gripal tip A, subtip H3N2, tulpină vaccinală, prin selecţie de subpopulaţii prin pasaje la diluţii limită, multiplicarea virală în sistem rotativ şi pe micro-purtători comparativ cu sistemul staţionar şi evaluarea stabilităţii genetice a virusului gripal multiplicat în cultură celulară. În plus s-au implementat şi optimizat metodele specifice secvenţierii de glucide N-legate, prin HPLC în faza normală. Metoda este sensibilă şi reproductibilă şi are avantajul de a nu necesita purificarea prealabilă a proteinei de interes.        

    Având în vedere că în etapele iniţiale s-au obţinut rezultate interesante cu privire la metabolismul energetic celular în diferite medii de cultură şi în prezenţa infecţiei cu virusuri diferite, o parte dintre experimente au fost extinse în scopul clarificării acestor aspecte.

    În final au fost elaborate documente de reglementare privind producerea vaccinurilor virale pe culturi celulare, constând într-un set de proceduri operaţionale standard pe baza rezultatelor obţinute în întreg proiectul. Acestea au fost completate cu experimente care fundamentează alegerea sistemelor de cultivare, procedurilor de adaptare şi în special cele de crioconservare a celulelor adaptate.         

COMINCARI IN CADRUL PROIECTULUI

·         Clucerescu L., Orasanu M., Gomoiu E., Nechifor M., Onu A – Adaptarea liniei celulare MDCK la cultivarea în medii fãrã proteine.     A 37-a Conferinta Nationaa de Imunologie, Iasi , 19-21 septembrie 2007

 

·         Studiul multiplicãrii virusului gripal vaccinal pe culturi celulare stationare – Alina Elena Bãetel, Gheorghe Necula, Mariana  Orãsanu, Valeria Clucerescu, Alina Gherghisor, Nuti Enache,Marina Nechifor,Emilia Lupulescu, Emil Gomoiu, Viorel Alexandrescu Al-IV-lea Simpozion “Acad. Nicolae Cajal”, 26-28 Martie 2008

 

·         Stabilitatea virusului gripal vaccinal multiplicat pe diferite substraturi  Gheorghe Necula, Alina Elena Bãetel, Camelia Small, Sorin Dinu, Gabriela Oprisan, Alina Gherghisor, Mirela Burcus, Emilia Dobre, Emil Ionitã, Emilia Lupulescu, Viorel Alexandrescu Al-IV-lea Simpozion “Acad. Nicolae Cajal”, 26-28 Martie 2008

 

·         Optimizarea cresterii celulelor pe purtatori in scopul producerii de vaccinuri virale pe CULTURI CELULARE         Alina Elena Băețel, Gheorghe Necula, Carmen Ghenu, Emilia Lupulescu, Maria Orăşanu, Emil Gomoiu, Marina Tamara Nechifor, Catalin Lazar, Norica Beatrice Nichita, Adrian Onu – A 38-a Conferinta Nationaa de Imunologie, Busteni , 23-26 septembrie 2008

Proiect CEEX nr. 33/2005

“Tehnologii de obtinere a unor compusi chimici prezenti in biomasa rezultata din procesul de vinificare, în scopul utilizarii lor în producerea de medicamente, cosmetice şi alimente functionale”

Director proiect: Beatrice Burghelea

Coordonator: Institutul National de Cercetare si Dezvolare pentru Microbiologie si Imunologie “CANTACUZINO” (INCDMIC)

Parteneri: Institutul de Cercetare Dezvoltare pentru Viticultură si Vinificaţie-Valea Calugareasca (ICDVV); Laboratorul Central pentru Controlul Calitatii si Igienei Vinului (LCCCIV); Institutul National de Cercetare-Dezvoltare Chimico-Farmaceutica (ICCF); S.C. Hofigal Export-Import S.A (HOFIGAL)

Perioada: 2005-2008

Obiective:  Proiectul si-a propus  sa stabileasca tehnologii de realizare a unui produs cu proprietati antioxidante care sa poata fi comercializat ca ingredient pentru producerea de medicamente, ca supliment alimentar, ca ingredient antioxidant in produse alimentare functionale sau in  produse cosmetice, folosind ca materie prima masa vegetala rezultata în urma proceselor de vinificare.  Pe langa aplicarea unor solutii noi legate de optimizarea metodelor de extractie (inlocuirea solventilor organici) sau de optimizare a metodelor de conservare (freeze-drying), proiectul a urmarit, pentru asigurarea calitatii acestui produs, implementarea unor metode standardizate de control calitativ (natura componentelor ), cantitativ (raport constituenti) si control al capacitatii de absorbtie a radicalilor de oxygen, metode recomandate prin reglementările Uniunii Europene.

Rezultate: Extractele polifenolice din Vitis vinifera sunt produse utilizate in general ca suplimente alimentare antioxidante. Datorita capacitatii lor antioxidative ele protejeaza organismul uman impotriva imbatranirii premature si a bolilor. In ultima perioada ele au inceput sa fie utilizate si ca ingrediente antioxidante in alimente functionale. Ele sunt utilizate deasemenea si in cosmetica pentru protejarea pielii impotriva actiunii efectelor radiatiilor UV  si a proceselor de imbatranire precum si pentru protejarea parului impotriva actiunii negative produse de uscarea prin caldura si impotriva  influntelor negative ale mediului inconjurator.

Pentru obtinerea unui extract care sa indeplineasca astfel de conditii au fost elaborate tehnologii de extractie si conservare specifice pentru doua tipuri de extract: „extract polifenolic total” si „extract polifenolic imbogatit”.

Aceste tehnologii constituie obiectul brevetului A/00501/2007 depus la OSIM. Ele descriu cai de obtinere  a unor extracte bogate în oligoproantocianidine (OPC), compusi polifenolici cu activitate antioxidanta, din semintele rezultate în urma procesului de vinificare a strugurilor albi sau negri. Aspectele de noutate se refera la utilizarea pentru extractie a unei metode care combina actiunea unei solutii hidroalcoolice asupra masei vegetale simultan cu actiunea unei temperaturi si presiuni ridicate  precum si la folosirea unui adsorbant cromatografic RP-8  pentru marirea concentratiei compusilor activi si pentru indepartarea compusilor glicozidici, a sarurilor si a oligoelementelor prezente în extractul total. Parametrii procesului de conservare prin inghetare-uscare in conditii de presiune joasa (liofilizare) au fost stabiliti experimental si sunt proprii fiecareia din cele doua forme de extract,  „extract   total” si „extract imbogatit”.

Calitatile biochimice au fost evidentiate prin testul Folin-Ciocalteu, testul vanilinic, analiza HPLC si testul ORAC, metode aprobate de EMEA (European Medicines Evaluation Agency, echivalentul european al  U.S.  Food and Drug Administration ). De asemenea, calitatile farmacologice au fost analizate prin metode acceptate de norme ale UE.

Cele doua forme de extract  rezultate in urma aplicarii acestor  tehnologii au un continut mare de polifenoli cu structura oligomera ( 80% si 99%), un continut mare de polifenoli monomerici si o activitate antioxidanta ridicata: 5000-6000 echivalenti de Trolox (analog sintetic al vitaminei E) pentru extractul total si 12.000 echivalenti Trolox (1 echivalent Trolox = 1μmol Trolox), situandu-se cu aceste valori (raportate la 1 gram de substanta uscata), alaturi de produse din aceeasi categorie existente pe piata europeana.

Extractul polifenolic total, TGSPE, se prezinta sub forma unei pudre brun-roscat, nehigroscopica si hidrosolubila, are un continut polifenolic cuprins intre 240 si 270 mgEAG/g, 83% oligomeri, 14-17% monomeri, 8-9% catechine, 3-5% epicatechine si 3-5% acid galic.

El nu prezinta toxicitate acuta sau toxicitate dupa doze repetate, putand fi utilizat ca ingredient farmaceutic, ca supliment alimentar sau ca ingredient in alimente functionale.

Testele non-clinice, efectuate cu acelasi tip de extract, au aratat ca acesta poate fi utilizat si ca ingredient functional cu proprietati antioxidante in produse cosmetice.

Comportarea extractului ca ingredient antioxidant pentru industria alimentara  si cosmetica a fost avidentiata prin realizarea de produse alimentare functionale si produse cosmetice. Atat in produsele alimetare cat si in cele cosmetice extractul polifenolic total TGSPE a demonstrat ca este compatibil cu tehnologiile specifice produselor realizate conferind acestora o activitate antioxidanta crescuta.

 

ARTICOLE SI COMUNICARI STIINTIFICE

1. „Extraction of bioactive compund in grape seeds” publicata de  Societatea Romana a Horticultorilor la  Editura „Ion Ionescu De La Brad”, Sectia Horticultura, Iasi 2008, Vol 51, autori: A Kontek, B Burghelea, A Tudorache, E Branduse, R Campeanu,

2. „Assessement of grape seeds and skins proanthocyanidins effects on lipid peroxidation, antioxidant enzyme systems and liver enzymes”, autori: G Caraene, C Nichita, G Radulescu V Vulturescu, R Albulescu, B Burghelea, R Campeanu, V Radulescu,  prezentata la „XXIVth International Conference on Polyphenols”, Salamanca Spania

3. „High pressure liquid chromatography (HPLC) and oxygen radical absorbance capacity (ORAC), standardized methods complying with the EU regulations concerning bioactive products obtained from grape seeds”, autori: B Burghelea, A Kontek, R Campeanu, G Caraene, A Lupu, R Porumb, L Cremer, A Tudorache, prezentata la Congresul 31 Mondial al Viei si Vinului, Verona, Italia 2008

4. „Role of Differential Scaning Calorimetry studies (DSC) in the protocol designing for bioconservation by freeze-drying of total grape seed polyphenolic extract (TGSPE)”, autori B Burghelea, P Budrugeac, R Campeanu, G Caraene, publicata in „Proceeding of the International Symposium “NEW RESEARCH IN BIOTECHNOLOGY” USAMV, Bucharest, Romania, 2008″ si prezentata la Simpozionul International „New Research in Biotechnology” organizat in perioada 20-21 noiembrie 2008 in Bucuresti

5. „Reevaluation of antioxidants compunds from native grape seeds for new cosmetics products”, autori: C Popescu, B Burghelea, E Mazilu, N Bordei, E Capitanu, G Alexandru, prezentata la Al 3-lea Simpozion de Etnofarmacologie/ Brasov/ 19-20 iunie 2008,

6. „Pharmacological evaluation of total grape seed polyphenolic extract as ingredient for functional food products complying with EU regulation concerning bioactive products”,autori: B Burghelea, G Caraene, R Campeanu, C Nichita, Georgeta Radulescu, V Vulturescu, A Lupu, „Proceeding of the International Symposium “NEW RESEARCH IN BIOTECHNOLOGY” USAMV, Bucharest, Romania, 2008″

7. „Pharmacological evaluation of total grape seed polyphenolic extract as ingredient for cosmetics complying with EU regulation concerning bioactive products”, autori: B Burghelea, G Caraene, R Campeanu, C Nichita, G Radulescu, V Vulturescu, A Lupu, publicata in „Proceeding of the International Symposium “NEW RESEARCH IN BIOTECHNOLOGY” USAMV, Bucharest, Romania, 2008″

8. „Extractul polifenolic total din semintele de struguri, ingredient antioxidant in alimentele functionale”, autori: B Burghelea, G Caraene, R Campeanu, V Vulturescu, C Nichita, G Radulescu, L. Cremer, R Albulescu, R Porumb, A. R. Lupu, G.Szegli, revista CALITA, nr. 68/ 2008.

9. „ Extractul polifenolic total din semintele de struguri (TGSPE), ingredient alimentar antioxidant in produse alimentare din fructe procesate”, autori: B Burghelea, L. Catana, M. Catana, M Negoita, R Campeanu, R Porumb, A.R. Lupu, L. Cremer, revista CALITA, nr. 68/ 2008.

10. „ Extractul polifenolic total din semintele de struguri (TGSPE), ingredient alimentar antioxidant in produse alimentare de patiserie si brutarie”, autori: B Burghelea, L. Catana, M. Catana, M Negoita, R Campeanu, R Porumb, A.R. Lupu, L. Cremer, revista CALITA, nr. 68/ 2008.

Proiect CEEX 6/2005

Director: Dr. Adrian ONU

Proiectul „Biotehnologii avansate de preparare a unor produse biologice terapeutice de uz uman şi de diagnostic cu integrarea unor metode optimizate de asigurare a calităţii şi de control, în conformitate cu standardele şi normele europene” a avut ca obiectiv principal îmbunătăţirea biotehnologiilor de preparare a unor produse de diagnostic si terapeutice de uz uman, proiectarea unor scheme si procese pentru obţinerea de noi bioproduse in scop comercial, proiectarea si realizarea incintelor si a instalaţiei de fabricaţie in „sistem închis”, in concordanta cu standardele europene de Buna Practica de Fabricaţie pentru produse medicamentoase in Institutul „Cantacuzino”.

Conceptul de GMP („Good Manufacturing Practices” – buna practică în fabricaţie) a fost iniţiat cu mai bine de 100 de ani în urmă odată cu înfiinţarea FDA şi extins ulterior în alte ţări. Acest concept şi-a demonstrat necesitatea după ce s-a dovedit că utilizarea fără precauţie a unor medicamente precum sulfaniamida sau talidomida a dus la evenimente nefericite. Conceptul de GMP a apărut ca un set de reglementări clar definite de către FDA în 1962, dar abia din 1990 a început armonizarea acestora la nivel internaţional.

Sistemul de reglementări este relativ nou faţă de dezvoltarea tehnologiilor de producţie şi s-a dezvoltat pe structura unor organisme de control al produselor medicamentoase şi ca urmare constă într-o serie de reguli de bază şi metode de control. Aceasta a dus la limitarea dezvoltării liniilor de producţie, impunându-se adaptări ale tehnologiilor existente. Concepte noi precum tehnologia analitică de proces se dezvoltă în ultima vreme pentru a permite dezvoltarea controlului în timp real şi ca urmare flexibilizarea producţiei.

Pornind de la reglementările existente in domeniu, s-a propus un model de dezvoltare flexibilă, bazat pe existenta unor unităţi modulare in structura de producţie. Au fost introduse conceptele de „protocol de compatibilitate” si de „tehnologie analitica de proces”, a căror aplicare facilitează schimbările in procesele biotehnologice actuale.

Pentru exemplificare, s-a ales un proces biotehnologic de producere a unui imunomodulator bacterian, dar modelul propus este aplicabil si altor produse terapeutice sau de diagnostic actuale sau potenţiale.

Verificarea practica a fost realizata pe câteva segmente care au fost considerate ca fiind de importanta primordială. Primul dintre ele a fost optimizarea producerii de masă bacteriana si colectare a informaţiilor pentru optimizarea mediului de cultură. În paralel cu metodele clasice de monitorizare  (densitatea optică, azotul aminic, masa celulară atât ca reziduu umed cit si uscat) au fost dezvoltate metode de analiză a aminoacizilor folosind tehnica cromatografiei de lichide de înalta performanta (HPLC). A fost evaluata, in cadrul metodologiei de studiu al proprietăţilor fizico-chimice ale biopreparatelor  si intermediarilor si extracţia cu solvenţi organici, pas critic datorita necesităţii măririi randamentului dar si reducerii volumelor de solvent pentru respectarea normelor actuale de mediu, focalizându-ne pe îmbunătăţirea metodelor ce conduc la creşterea randamentului de extracţie.

In cadrul încercărilor de a extinde metodologia tehnologiilor analitice de proces fost evaluată de asemenea electroforeza bidimensională (2D) care este considerată cea mai sensibilă metodă de separare si identificare a proteinelor normale si anormale, mapele obţinute fiind corelate cu fiecare moment de dezvoltare a microorganismului. A fost de asemenea evaluata aplicarea metodelor avansate de analiză fizico-chimică, biochimică, imunochimică şi de biologie moleculară în caracterizarea bioproduselor, obţinându-se rezultate interesante prin analiza termică diferenţială. Aplicarea metodelor genomicii în caracterizarea tulpinilor bacteriene folosite în bioprocese a fost de asemenea o ţinta a acestui proiect. Nu în ultimul rând, în scopul caracterizării bioproduselor din punct de vedere biochimic şi imunologic au fost reevaluate si folosite o serie de teste in vivo şi in vitro.

In final, pentru verificarea modelului de reajustare a condiţiilor de obţinere a masei bacteriene, a fost realizată trecerea pe reactoare de generaţie nouă de unică folosinţă si a fost testat sistemul închis in diferite variante. In aceste teste, pentru obiectivare, au fost folosite metode dezvoltate in cursul proiectului.

Aceste rezultate au demonstrat fezabilitatea folosirii sistemelor alternative de producţie si au creat cadrul dezvoltării unor linii tehnologice îmbunătăţite.

Consorţiul proiectului, constituit din instituţiile semnatare,  agreează ideea de a participa la crearea unei platforme tehnologice de cercetare-dezvoltare şi învăţământ pentru dezvoltarea acestor tehnologii.

Rezultatele proiectului constau într-o serie de rapoarte de experimentare si proceduri de operare standard care pot constitui baza dezvoltării unei tehnologii de producţie si control. Deoarece procedurile şi tehnologiile rezultate se bazează pe expertiza de lunga durată a specialiştilor fiecărui partener, acestea aparţin instituţiilor în care s-au realizat si testat.

O parte dintre rezultatele proiectului au fost comunicate la manifestari stiintifice interne si internationale. Pentru acestea, difuzarea lor prin alte metode (publicare în reviste de circulaţie naţională si internaţională, introducere în sinteze, manuale sau alt tip de cărţi) se va face cu acordul instituţiilor care sunt reprezentate în lista de autori din momentul comunicării.

Pentru rezultatele preliminarii care nu au putut fi finalizate în timpul prezentului proiect partenerii agreează ideea de continua cercetările prin participare la programe interne, internaţionale sau colaborări directe inter-instituţionale în măsura posibilităţilor.

Articole, cărţi, comunicări ştiinţifice, alte publicaţii rezultate din proiect:

1.    Ungureanu, C., Chirvase, A. A., Radu, N., Onu A., Sălăgeanu, A., Stoica, I., Hilebrand, Antohe, M. F., „Manual de prezentare biotehnologii avansate de preparare a unor produse biologice terapeutice de uz uman si de diagnostic cu integrarea unor metode optimizate de asigurare a calitătii si de control, in conformitate cu standardele si normele europene”, ISBN: 978-973-7838-92-6, Politehnica Press, 2008, 114 pag.

2.    C. Ungureanu, M. Caramihai, A. A. Chirvase, O. Muntean, I. Nagy, A. Onu, A. Sălăgeanu, „Model and kinetic parameters identification for therapeutical product obtaining according to the GMP guidelines”, Revista de chimie 2008, 59 (7), 762-765, ISSN 0034-7752

3.    Ungureanu C, Chirvase A A, Muntean O, Nagy I, Onu A, Salageanu A, „Technological study of an aerobic bioprocess for a bacterial pharmaceutical preparation”, U.P.B. Sci. Bull. 2007, Series B, 69 (3) 19-26, revista cotata CNCSIS categoria B+, ISSN 1454-2331

4.    Caras I, Tucureanu C, Lerescu L, Salageanu A, „Bacterial Product Cantastim Derived from Pseudomonas aeruginosa Induces Migration and Maturation of Dendritic Cells”,  Roum Arch Microbiol Immunol. 2007,  66 (1-2), 5-9, PMID: 18928056 [PubMed - indexed for MEDLINE]

5.    Lerescu L, Tucureanu C, Caras I, Salageanu A, “Cytokine Profiling by Multiplex Immunoassay as an Effective Approach to Assess Immunomodulatory Activity of Bacterial Product Cantastim”, Roum. Arch Microbiol Immunol. 2006, 65(1-2), 53-58, PMID: 17877111 [PubMed - indexed for MEDLINE]

6.    Camelia Ungureanu, Dima, R., Onu, A., Mihalcea, A. „Separation by microfiltration of Pseudomonas aeruginosa cells from the culture broth”, Revista de chimie, 2009, 60 (1), 48-54, ISSN 0034-7752

7.    Ungureanu, C., Chirvase, A. A., Muntean, O. “The optimizing concept of obtaining a therapeutical product according to the GMP guidelines“, 4th Symposium with International Participation „Drug Research Between Information and Life Sciences”, pp.7-8, ISSN 1842-4745, Bucuresti,19-20 Octombrie 2006

8.    Ungureanu, C., Chirvase, A. A., Muntean, O. “Operarea discontinuă repetată a unui reactor biochimic“, A XXIX-a Conferintă Natională de Chimie, Călimănesti-Căciulata, pp. 338, ISBN 13 978 973 750 049-6, 04-06 octombrie 2006

9.    Ungureanu C, Muntean O, Chirvase  A A, Nagy I, Onu A, Salageanu A, Mihalcea A, “The technological optimisation of aerobic bioprocess for a bacterial immunomodulator obtaining “, Romanian International Conference on Chemistry and Chemical Engineering, RICCCE 15, Sinaia, Romania, 19-22 Septembrie, 2007, Ed. Printech, S-4-2 – S-4-3, ISBN 978-973-718-785-7

10. Ungureanu C, Muntean O, Caramihai M, Onu A, Chirvase A A, Sălăgeanu A, Mihalcea A, Nagy I, “Model and kinetic parameters identification for a microbial immunomodulator biosynthesis” The First International Proficiency Testing Conference, 340-346, Sinaia, 11 – 13 Octombrie, 2007, ISBN 978-973-8132-65-8

11.  Ungureanu C, Muntean O, Chirvase  A A, Nagy I, Onu A, Salageanu A, Mihalcea A, “The cultivation of Pseudomonas aeruginosa for therapeutic purpose“, 13th European Congress on Biotechnology, Section Industrial Biotechnology, Barcelona, Spain, 16-19 september, 2007, Journal of Biotechnology 2007, 131(2), Supp.1, S138-139, ISSN 0168-1656

12. Ungureanu, C., Chirvase, A. A., Muntean, O., Nagy, I., Onu, A., Sălăgeanu, A., Mihalcea, A., “Elaborarea conceptului de operare “Repeated Batch” pentru bioprocesare de obtinere substante terapeutice“, A VIII-a Conferintă de Inginerie Biomedicala, INGIMED, participare internatională, CDROM, ISBN10: 973-8408-28-8 si ISBN13 (EBN): 978-973-8408-28-9, Bucuresti, 8-9 Noiembrie 2007

13. Ungureanu, C., Radu, N., Chirvase, A. A., Muntean, O., Nagy, I., Onu, A., Sălăgeanu, A., Mihalcea, A.  , ” Optimizarea bioprocesului aerob de obtinerea unui imunomodulator din Pseudomonas aeruginosa“, Simpozionul International Prioritătile Chimiei pentru o dezvoltare durabila -PRIOCHEM-, ICECHIM, pp. 7, vol. Rezumate, Bucuresti 29-30 octombrie 2007

14. Ungureanu, C., Dima, R., Chirvase, A. A., Muntean, O., Radu, N., Onu, A., Sălăgeanu, A., ” Ultrafiltration of a bacterial immunomodulator for pharmaceutic use – experiment and design“, 7th European Symposium on Biochemical Engineering Science”, Book of Abstracts, pp. 193, Faro, Portugalia,  7-10 Septembrie 2008

15. Ungureanu, C., Caramihai, M., Chirvase, A. A., Muntean, O., Onu, A., ” Modelisation de la cinetique de croissance d’une bacterie produisant un immunomodulateur therapeutique“, La 5eme Conference Internationale Francophone d’Automatique, CD, ISBN 978-2-915913-24-8, EAN 9782915913248, Bucuresti, 3-5 Septembrie, 2008

16. Aurora Salageanu, Olaf Nauen, Luigi Silvestro, Catalin Tucureanu, Lucian Lerescu, Raluca Boghean, Roxana Pispiris, Mihaela Gheorghe, Adrian Onu, “Separarea si identificarea fractiunilor active din extractul bacterian CANTASTIM“, A XXXVII -a Conferinta Nationala de Imunologie, Iasi, 19-21 Septembrie 2007, ISBN 978-973-716-707-1