CENTRELE NATIONALE DE REFERINTA

LABORATORUL INFECTII NOSOCOMIALE SI REZISTENTA LA ANTIBIOTICE


Personal:


Sef laborator :

- Conf. Dr. Irina Codita, CS I (icodita@cantacuzino.ro; staphylo@cantacuzino.ro)

Cadre superioare:

- Ana-Maria Petrescu, medic specialist, fizician, (pseudomonas@cantacuzino.ro)

- Brandusa Elena Lixandru, biolog specialist, (pseudomonas@cantacuzino.ro)

- Elena Carmina Dragulescu, biolog, asistent cercetare, (pseudomonas@cantacuzino.ro)

- Luminita Ileana Coldea, medic rezident, asistent cercetare, (staphylo@cantacuzino.ro)

Asistenti medicali:

- Niculita Dumitra, asistent de laborator

Laboranti:

- Maria Copoieru, PSV I



Laboratorul Infectii Nosocomiale si Rezistenta la Antibiotice coordoneaza componenta de investigare cu laboratorul a infectiilor nosocomiale si rezistentei la antibiotice in cadrul programelor nationale: program sentinela pentru supravegherea infectiilor nosocomiale, program national de supraveghere a rezistentei la antibiotice, inclusiv supravegherea microorganismelor izolate din infectii invazive, conform protocoalelor sistemului European de Supraveghere a Rezistentei la Antibiotice (EARSS) etc.


In acest context, colaboreaza cu toate celelalte laboratoare de referinta din INCDMI “Cantacuzino” participante in programele nationale mentionate, respectiv: Laboratorul Infectii Enterice Bacteriene, Laboratorul Infectii Respiratorii Bacteriene, Laboratorul Infectii Micotice etc., precum si cu laboratoarele din tara.


Elaboreaza in colaborare cu laboratoarele din INCDMI “Cantacuzino” si difuzeaza la nivelul institutului si al laboratoarelor din teren ghiduri si proceduri pentru investigarea microbiologica a infectiilor nosocomiale si testarea sensibilitatii la antibiotice a microorganismelor izolate.

Participa la derularea controlului extern de calitate in cadrul EARSS si primeste tulpini pentru caracterizare in cadrul unor scheme de control extern de calitate pentru testarea sensibilitatii la antibiotice si/sau identificarea microorganismelor bacteriene, pe care le distribuie si laboratoarelor din institut cu care colaboreaza, in functie de microorganismul primit spre investigare.

Trimite rezultatele analizelor catre unitatile participante la programele de supraveghere. Centralizeaza si raporteaza rezultatele catre Centrul National pentru Prevenirea si Controlul Bolilor Transmisibile.

Disemineaza rezultatele cu ocazia intalnirilor stiintifice interne si internationale.

Desfasoara activitati de cercetare cu caracter aplicativ si fundamental, in primul caz In scopul armonizarii metodelor si tehnicilor utilizate in programele de supraveghere, in cel de-al doilea pentru elucidarea unor aspecte privind mecanismele patogenice ale infectiilor stafilococice.

Participa la procesul de educare a noilor generatii de medici de laborator si la perfectionarea specialistilor microbiologi.

Laboratorul Infectii Nosocomiale si rezistenta la Antibiotice are in componenta 2 Centre Nationale de Referinta:


- Centrul National de Referinta pentru Stafilococ

- Centrul National de Referinta pentru Pseudomonas



CENTRUL NATIONAL DE REFERINTA PENTRU STAFILOCOC

Activitati de expertiza microbiologica:


1. Investigarea particularitatilor de patogenitate si a circulatiei diverselor specii si clone de stafilococi la nivelul unor unitati, regiuni si/sau la nivel national,

2. Identificarea de specie si de subspecie pentru stabilirea prevalentei diferitilor taxoni in infectii si la purtatori sanatosi necesara interpretarii rezultatelor investigatiei microbiologice

3. Tipizarea tulpinilor in cadrul unor anchete epidemiologice, prin metode fenotipice (incadrare taxonomica, tipizare bacteriofagica, pattern-uri de rezistenta la antibiotice etc.) si/sau moleculare pentru decelarea tulpinilor epidemice si/sau endemice, precum si sursele si caile de transmitere a unor infectii cu caracter epidemic sau endemic.

4. Studiul rezistentei la antibiotice: studiul caracterelor fenotipice de rezistenta ale tulpinilor circulante si al mecanismelor genetice ale acesteia, in scopul fundamentarii politicii locale si nationale de utilizare a antibioticelor

5. Obiective tinand de asigurarea calitatii si fiabilitatii analizelor de laborator in domeniul diagnosticului microbiologic al infectiilor stafilococice.


Prestatii  pentru laboratorele din teren:

- izolari si identificari/confirmari microbiologice din infectii recidivante sau cu potential crescut de agresivitate; teste de patogenitate

- lizotipii pentru tulpini S.aureus

- testarea rezistentei la antibiotice (antibiograma difuzimetrica – citire clasica sau cu sistem OSIRIS -, determinarea concentratiei minime inhibitorii – dilutii in agar, microdilutii in bulion, E-test, sistem automat Vitek2).

- genotipare (la cerere, in focare sau in situatii epidemiologice speciale)


Activitati suport :

- intretinerea trusei de bacteriofagi si colectiei de culturi microbiene a laboratorului


Participare in programe si retele:

  • nationale:

- Sistem Santinela pentru Supravegherea Infectiilor Nosocomiale

- Sistem National de Supraveghere a Rezistentei la Antibiotice

- Platforma integrata de patogenomica (functioneaza in cadrul proiectului de cercetare CEEX nr. 28)

  • internationale:

-          Reteaua Europeana de Supraveghere a Rezistentei la Antibiotice (EARSS)

-          Initiativa Europeana Seqnet.org – tipizarea prin compararea secventelor genei spa la S. aureus

-          Program bilateral EGIDE, ECONET, finantat de Ministerul Afacerilor Externe din Franta –  Commensalisme et infections urinaires à Escherichia coli multirésistants de part et d’autre de la frontière de l’Union Européenne » -  Cod proiect : 18876QJ

-          Programe de control extern de calitate



Proiecte de cercetare derulate  in 2007


1. “Retea (platforma) integrata de patogenomica pentru transferarea rezultatelor cercetarii in domeniul medical (microbiologia bolilor infectioase)”, proiect CEEX 28, director proiect dr. Irina Codita



Proiecte in derulare 2008:


“Retea (platforma) integrata de patogenomica pentru transferarea rezultatelor cercetarii in domeniul medical (microbiologia bolilor infectioase)”, proiect CEEX 28, director proiect dr. Irina Codita



Lucrari publicate in 2006/2007:

-          Mihaela Popa, Irina Codita – Metode de tipizare moleculara a SAMR — Bacteriologia, virusologia, parazitologia, 2006, 51, 1-2

-          Virgilia Popa, Irina Nica, C. Stoica, Irina Codita, Vasilica Ungureanu, Monica Ghita, N.Catana, Daniela Botus, Corina Roman, F. Pastrama, G. Rapuntean, Revista Romana de Medicina Veterinara (CNCSIS B239),  2007, 17(4): 129-136

-          Caracterizarea tulpinilor de Enterococcus faecium prin studiul polimorfismului genetic al locilor VNTR – M. De Kraker, N van de Sande-Bruisma, on behalf of all EARSS participants (Corporate author: Romania – I. Codita ), Trends in antimicrobial resistance in Europe: update of EARSS results – 2007, 12 (3) (ISSN 1560-7917 electronic), 2007



Lucrari comunicate 2006-2007:

Manifestari internationale:

- Antimicrobial resistance trends in invasive strains of S. aureus, E. coli, Streptococcus pneumoniae, and Enterococcus spp. in Romania – a four years participation in the EARSS – Irina Codita, Carmen Balotescu, Anca Michaela Israil, Mihaela Popa, Dorina Tatu-Chitoiu, Vasilica Ungureanu, Marina Pana, Maria Ghita and Romanian hospital participant laboratories – 16th European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases, 1-4 april 2006, Nice, France

- Detection of Enterotoxine B producing Staphylococcus aureus directly from milk – Mihaela Popa, Irina Codita, Maria Surdeanu, Monica Straut, Silvia-Mariana Cretoiu and M. Negut – 16th European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases, 1-4 april 2006, Nice, France

- Recent  progress in Romanian reference laboratory capacities for the investigation of S. aureus nosocomial infections with European support – Codita. I , Popa. M, Straut. M, – 2nd FEMS Congress of European Microbiologist, Madrid, 4-8 july 2006, Madrid, Spain

- Using PFGE to learn MRSA strains story in Bucharest hospitals – Cretoiu, S, Codita, I, Straut, M,  Surdeanu, Popa, M – 2nd FEMS Congress of European Microbiologist, Madrid, 4-8 july 2006, Madrid, Spain

- Antimicrobial resistance in strains isolated in 2005 by Romanian National Sentinel System for Nosocomial Infections Surveillance – Irina Codita, Mihaela 0prea, Ana-Maria Petrescu, Dorina Tatu-Chitoiu, Vasilica Ungureanu, Maria Ghita, Daniela Lemeni, Rodica  Dorin, Dana Brehar-Cioflec, Angela Romaniuc and microbiologists from Arad, Bucuresti, Craiova, Galati, Iasi, Sibiu, Timisoara and Suceava hospital laboratories – 17th ECCMID, Muenich, Germany, 31 March-3 April, 2007

- Characterization of S. aureus strains  isolated from nosocomial infection suspected cases in 2005 – Irina Codita, Mihaela Oprea, Cerasela Dragomirescu and microbiologists from Arad, Bucuresti, Craiova, Galati, Iasi, Sibiu, Timisoara and Suceava hospital laboratories submitted for 17th ECCMID, Muenich, Germany, 31 March-3 April, 2007

- Characterisation of Staphylococcus aureus strains isolated in Intensive Care Units in Romania, in ian.2006 – apr. 2007 interval – Mihaela Oprea, Irina Codita, Carmina Dragulescu, Monica Straut – 5th Balkan Congress for Microbiology, Budva, Muntenegru, October, 24 – 27, 2007



Manifestari nationale:

- Tulpini microbiene izolate din infectii nosocomiale in anul 2005 in sistemul national santinela caracterizate in INCDMI “Cantacuzino” – Irina Codita, Ana-Maria Petrescu, Dorina Tatu-Chitoiu, Vasilica Ungureanu, Maria Ghita, Daniela Lemeni, Rodica Dorin si Laboratoarele Spitalelor din Arad, Bucuresti, Craiova, Galati, Iasi, Sibiu Si Timisoara – Reuniunea Anuala de Microbiologie, Cluj-Napoca, 21-23 sept.2006

- Rezistenta la antibiotice a tulpinilor de S.aureus izolate din cazurile de infectii nosocomiale in anul 2005 – Irina Codita, Mihaela Oprea, Cerasela Dragomirescu – Reuniunea Anuala de Microbiologie, Cluj-Napoca, 21-23 sept.2006

- Caracterizarea si evidentierea relatiilor clonale ale unor tulpini de Staphylococcus aureus cu acelasi lizotip isolate in spitale din Romania – Mihaela Oprea, Irina Codita, Elena-Carmina Dragulescu, Cristiana Cerasella Dragomirescu, Luminita Coldea,  Monica Straut – A XI-a Reuniune Anuala de Microbiologie, 24 – 26 mai 2007, Mamaia, Romania

- Detectarea rapida a tulpinilor de Staphylococcus aureus comunitar meticilino-rezistent folosind tehnica PCR multiplex – Elena-Carmina Dragulescu, Mihaela Oprea, Irina Codita, Monica Straut -A XI-a Reuniune Anuala de Microbiologie, 24 – 26 mai 2007, Mamaia, Romania

- Caracterizarea fenotipica a tulpinilor bacteriene primite la  INCDMI Cantacuzino in cadrul programului national sentinela pentru supravegherea infectiilor nosocomiale in anul 2006 -. Cristiana Cerasella Dragomirescu, Dorina Tatu-Chitoiu, Stefania Ceciu, Brandusa Elena Lixandru, Ana Maria Petrescu, Mihaela Oprea, Luminita Coldea, Maria Ghita, Rodica Oancea, Gratiana Chicin, Dana Brehar Cioflec, Angela Romaniuc, Roxana Serban, Adriana Pistol, Irina Codita – A XI-a Reuniune Anuala de Microbiologie, 24 – 26 mai 2007, Mamaia, Romania

- Candida albicans – Algoritm de diagnostic – Botoran Andreea, Oancea Rodica, Nica Maria, Constantin Mariana, Oprea Mihaela, Irina Codita – A XI-a Reuniune Anuala de Microbiologie, 24 – 26 mai 2007, Mamaia, Romania

- Rolul laboratorului de microbiologie in prevenirea si controlul infectiilor nosocomiale – Irina Codita – A XI-a Reuniune Anuala de Microbiologie, 24 – 26 mai 2007, Mamaia, Romania

- Sistemul national de supraveghere a infectiilor nosocomiale tip sentinela. Caracterizarea microbiologica a tulpinilor de Staphylococcus aureus primite de LNR pentru Infectii Nosocomiale si Rezistenta la Antibiotice in anul 2006 – Irina Codita, Adriana Pistol, Roxana Serban, Mihaela Oprea, Gratiana Chicin, Dana Brehar Cioflec, Angela Romaniuc, Cerasela Dragomirescu – A XI-a Reuniune Anuala de Microbiologie, 24 – 26 mai 2007, Mamaia, Romania

- Caracterizarea si evidentierea relatiilor clonale ale unor tulpini de Staphylococcus aureus cu acelasi lizotip izolate in spitale din Romania – Mihaela Oprea, Irina Codita, Elena-Carmina Dragulescu, Cristiana Cerasella Dragomirescu, Luminita Coldea,  Monica Straut – Simpozionul National de Cercetare Stintifica Medicala de Excelenta, 25-26 octombrie 2007, Sibiu

- Ghid national pentru aplicarea procedurii de testare
a sensibilitatii la antibiotice conform standardului CLSI/NCCLS – Irina Codita – A 3-a Conferinta a ALMR, 27-29 iunie 2007, Iasi, Romania

- Caracterizarea tulpinilor de Enterococcus faecium prin studiul polimorfismului genetic (VNTR) – Virgilia Popa, Irina Nica, C. Stoica, Irina Codiţă, Vasilica Ungureanu, Monica Ghiţă, Nicolae Catană, Daniela Botuş, Ramona Mihăilescu – Al X-lea Congres National de Medicina Veterinara, 18-21 septembrie, Poiana Brasov, Romania – volumul de rezumate pg.54 – 56

- Caracterizarea şi diferenţierea clonală a unor tulpini de Staphylococcus aureus cu acelaşi lizotip, utilizând tehnici de microbiologie moleculară -  M. Oprea, C. Dragomirescu, C. Drăgulescu, L. Coldea, I. Codiţă, M. Străuţ, Al III-lea Simpozion „Acad. N. Cajal”, 28-29 martie 2007, Bucureşti, Romania



Realizari tehnice in anul 2006-2007:


- perfectionarea tehnicii PFGE pentru S.aureus

- introducerea tipizarii prin secventiere (spa-typing si MLST)

- utilizarea tehnicii multiplex PCR pentru detectarea genelor nuc pentru termonucleaza, mecA – marker de rezistenta la meticilina, lukS/F pentru leucocodina Panton Valentine

Perspective 2008/2009:

-          baza de date tulpini S.aureus caracterizate complex prin tehnici de biologie moleculara (PFGE, spa-type, MLST, tipizare SCCmec, markeri genetici de patogenitate si rezistenta la antibiotice etc.)

-          colectie tulpini S. aureus caracterizate complex

-          optimizarea tehnicii pentru tipizarea SCCmec a S. aureus in conditiile laboratorului nostru

-          proiecte de cercetare fundamentala si aplicata, in functie de rezultatele ce vor fi obtinute (aplicatii pentru 5 proiecte in 2008, dintre care 4 in colaborare)



CENTRUL NATIONAL DE REFERINTA PENTRU PSEUDOMONAS

Activitati de expertiza microbiologica

  • Efectuarea diagnosticului microbiologic (identificare de specii si subspecii) pentru bacili Gram negativi nefermentativi, cu scopul stabilirii prevalentei diferitilor taxoni in infectii si la purtatori sanatosi, necesara interpretarii rezultatelor investigatiei microbiologice.
  • Orientarea masurilor de supraveghere si control a infectiilor piocianice, prin determinarea markerilor epidemiologici fenotipici (serotip, lizotip, pattern-uri de rezistenta la antibiotice ) si/sau moleculari pentru tulpinile de P.aeruginosa circulante la om, precum si cele izolate din mediul spitalicesc, si mediul extern
  • Studiul rezistentei la antibiotice, prin detectarea de noi fenotipuri de rezistenta la antibiotice, identificarea mecanismelor si genelor implicate, in special la bacterii multirezistente din genurile Pseudomonas si Acinetobacter, responsabile de infectiile nosocomiale.
  • Contributii la cunoasterea evolutiei si ecologiei principalelor mecanisme de rezistenta la antibiotice pe plan national (emergenta, selectia, si circulatia rezistentei in/intre ecosisteme, dinamica transmiterii bacteriilor rezistente inter-indivizi, si transmitarea genelor de rezistenta inter-specii).
  • Obiective tinand de asigurarea calitatii si fiabilitatii analizelor de laborator in domeniul diagnosticului microbiologic al infectiilor cu bacili si/sau cocobacili Gram negativi nefermentativi din genurile Pseudomonas, Acinetobacter, Stenotrophomonas, Burkholderia.
  • Contributia la programe de formare continua, pentru a sprijini laboratoarelor de bacteriologie de la nivel national, pentru detectarea mecanismelor de rezistenta emergente.



Activitati de asistenta tehnica pentru laboratoarele din teren:

- izolari si identificari microbiologice din infectii recidivante sau cu potential crescut de agresivitate; teste de patogenitate

- serotipii pentru tulpini P.aeruginosa

- lizotipii pentru tulpini P.aeruginosa

- testarea rezistentei la antibiotice (antibiograma difuzimetrica – citire clasica sau cu sistem OSIRIS -, determinarea concentratiei minime inhibitorii – E-test, sistem automat Vitek2, detectare beta lactamaze cu spectru extins).


Activitati suport :

-intretinerea trusei de reactivi coaglutinanti

- intretinerea trusei de bacteriofagi

- intretinerea colectiei de tulpini Pseudomonas aeruginosa a laboratorului



Participare in programe si retele:

  • nationale:


- Sistem Sentinela pentru Supravegherea Infectiilor Nosocomiale

- Sistem National de Supraveghere a Rezistentei la Antibiotice


  • internationale:


-          Reteaua Europeana de Supraveghere a Rezistentei la Antibiotice (EARSS)

-          Program bilateral EGIDE, ECONET, finantat de Ministerul Afacerilor Externe din Franta –  Commensalisme et infections urinaires à Escherichia coli multirésistants de part et d’autre de la frontière de l’Union Européenne » -  Cod proiect : 18876QJ

-          Programe de control extern de calitate



Proiecte de cercetare derulate  in 2006/2007

“Tratamentul cu noi macrolide in infectiile pulmonare cronice cu Pseudomonas aeruginosa” -proiect Viasan nr. 416, Director proiect Dr. Maria Zlatev-Ionescu, Responsabil proiect INCDMI Cantacuzino – Dr. Petrescu Ana-Maria

“Produse de igienizare biocide pentru domeniul industrial si institutional cu impact ecologic redus” – Program Relansin Director proiect, Ing. Lucia Ilie, Responsabil Proiect INCDMI Cantacuzino Dr. Petrescu  Ana Maria

“Evaluarea rolului etiologic al microorganismelor emergente in infectiile umane. Utilizarea unor markeri fenotipici si moleculari in monitorizarea acestora” – Program Biotech 143/2006 – Director proiect Dr. Maria Damian



Lucrari comunicate in 2006/2007 :

- Susceptibility of multiresistant bacteria and fungi to the new synergistic biocide formulations -   Sanda Velea, Lucia Ilie, Ana-Maria Petrescu, Stela Florescu – poster prezentat la al 36-lea Simpozion de Detergenti si Auxiliari, organizat de Comitetul Spaniol de Detergenti CED -Barcelona -Spania, 29-30 martie 2006

- Long term treatment with azithromicin in chronic respiratory infectious with Pseudomonas aeruginosa – Maria Zlatev Ionescu, MD, Maria Nica, MD, Ana-Maria Petrescu, Ph D, Olimpia Nicolaescu, Ph D, Iuliana Apostol, MD, Cristina Calomfirescu, Ph D and Petre Iacob Calistru, Ph D – poster: 16th ERS (European Respiratory Society) Annual Congress, Munich, Germany, September 2-6, 2006; Abstract in European Respiratory Journal, 28 (supplement 50), sept. 2006, p. 558s, P3213

- Produse de igienizare biocide pentru domeniul industrial si institutional cu impact ecologic redus: transfer tehnologic – Lucia Ilie, Sanda Velea, Stela Florescu, Ana-Maria Petrescu, Paula Constantinescu – comunicare la Simpozionul International “Prioritatile chimiei pentru o dezvoltare durabila” , Bucuresti , 26-27 octombrie 2006

-Tulpini microbiene izolate din infectii nosocomiale in anul 2005 in sistemul national sentinela caracterizate in INCDMI „Cantacuzino” -  Irina Codita, Ana Maria Petrescu, Dorina Tatu-Chitoiu, Vasilica Ungureanu, Maria Ghita, Daniela Lemeni, Rodica Dorin si Laboratoarele spitalelor din Arad, Bucuresti, Craiova, Galati, Iasi, Sibiu si Timisoara- Reuniunea Anuala de Microbiologie, Cluj-Napoca, 21-23 sept.2006



Anexe:


1. Sinteza rezultatelor obtinute – program sentinela pentru supravegherea infectiilor nosocomiale in 2007


In cadrul Programului Sentinela de Supraveghere a Infectiilor Nosocomiale, la CNR pentru Stafilococ, au fost primite in anul 2006 un numar de 146 tulpini din genurile  Staphylococcus si Micrococcus de la unitati sentinela. Tulpinile au provenit din 14 spitale, dintre care numai 7 spitale au participat cu peste 10 tulpini.

Cele mai multe tulpini au provenit din secretei bont ombilical si plagi.

Dintre tulpinile primite, 122 au fost S. aureus.

Un procent de 65% dintre tulpinile primite au fost rezistente la meticilina, procent care se apropie de cele raportate in cadrul programului EARSS in anii precedenti) – www.earss.rivm.nl

Dintre cele 122 tulpini de S. aureus, 94 (77,04%) au fost rezistente la eritromicina.

Dintre cele 94 de tulpini de S. aureus rezistent la eritromicina, 49 au prezentat fenotip MLSB (2 MLSBc si 47 MLSBi).

Numai 35 (28,68%) dintre tulpinile de S. aureus au fost sensibile la toate aminoglicozidele, in timp ce 55, 73% au fost rezistente la kanamicina si 15,57% au prezentat fenotip KTG, cu rezistenta la toate aminoglicozidele datarata enzimei bifunctionale.

Luand in considerare separat tulpinile de Staphylococcus aureus rezistent la meticilina (SAMR), respectiv S. aureus sensibil la meticilina (SAMS), se poate constata faptul ca majoritatea tulpinilor rezistente la aminoglicozide (fenotip K si/sau KTG) provin dintre tulpinile SAMR, iar majoritatea tulpinilor cu fenotip salbatic provin din tulpinile SAMS. Fenotipul salbatic nu este intalnit la tulpinile SAMS, dupa cum fenotipul KTG nu este intalnit la tulpinile SAMS.

Cu exceptia eritromicinei si aminoglicozidelor, tulpinile SAMR nu au prezentat preocente inalte de rezistenta la alte antibiotice.

Nici o tulpina din cele 146 testate nu a fost rezistenta la vancomicina, linezolid, quinopristin/dalfopristin si telithromicina.

Sensibilitatea la bacteriofagi a permis incadrarea tulpinilor in grupe fagice in proportie de 83%. Tipabilitatea a crescut in acest an cu aproximativ 8 procente.

Majoritatea tulpinilor s-au incadrat in Grupul fagic 3.

La CNR pentru Pseudomonas, au fost primite in anul 2007 un numar de 109 tulpini de la unitati sentinela participante in Programul Sentinela de Supraveghere a Infectiilor Nosocomiale, iar un numar de 56 tulpini de la alte unitati care nu sunt incluse in lista unitatilor sentinela. Tulpinile aferente supravegherii in sistem sentinela au provenit de la 9 spitale, dintre care 5 au participat cu mai mult de 10 tulpini. Au mai trimis tulpini provenind din infectii nosocomiale alte 4 spitale neincluse in sistemul de supraveghere tip sentinela, dintre care o unitate a trimis 51 tulpini.

Un numar de 95 dintre cele 105 tulpini au apartinut speciei Pseudomonas aeruginosa.

Din unitatile sentinela au fost primite si un  numar de 13 tulpini de Acinetobacter baumanii.

Cele mai multe tulpini de Pseudomonas aeruginosa si Acinetobacter baumanii au provenit din secretii plaga si sputa.

Dintre tulpinile de Pseudomonas aeruginisa, 42% nu au fost rezistente la nici un aminoglicozid, dar 36% au avut fenotip GNtTA, fiind rezistente la toate aminoglicozidele.

Si in cazul quinolonelor, 39% dintre tulpini au avut fenotip salbatic, sensibil la toate quinolonele, dar 48% s-au incadrat in fenotipul IV, rezistent la toate quinolonele testate.

In ce priveste rezistenta la beta-lactamine, un numar de 34% dintre tulpini au prezentat rezistenta la toate antibioticele testate, iar 76% tulpini au prezentat fenotip salbatic. Au fost detectate mecanisme de rezistenta specifice (absenta exprimarii porinelor, supraexpresia pompelor de eflux, AmpC, penicilinaze etc.).

Similar anului  2006, s-a remarcat prevalenta tulpinilor de Pseudomonas aeruginosa serotip III (25 tulpini), urmate de tulpinile de serotip XV (20 tulpini), si apoi tulpinile cu serotip I-IV si V (15 tulpini din fiecare serotip).

Un procent de 60% din tulpinile de Pseudomonas aeruginosa (57 tulpini) au fost rezistente la actiunea bacteriofagilor (netipabile), observandu-se fata de anul 2006 o scadere a numarului de tulpini netipabile. Cel mai frecevnt intanlite lizotipuri au fost 1a  si 5i.

Tulpinilor de Acinetobacter baumanni auprezentat rezistente multipla la antibiotice din clasa beta-lactaminelor, prin 2 mecanisme principale:

Ø  rezistenta la carboxi- si ureidopeniciline si cefalosporinele din generatia a-3-a prin sinteza de beta-lactamaze TEM si OXA si hiperproducerea de cefalosporinaze cromozomale (4 tulpini)

Ø  Rezistenta la toate clasele de beta-lactamine prin acumulare de mecanisme: producere de beta-lactamaze , hiperproducerea de cefalosporinaze si impermeabilitate specifica (5 tulpini)

 

 

Pentru Pseudomonas aeruginosa exista colaborari cu Laboratorul de Microbiologie moleculara, care urmaresc in special studiul mecanismelor de rezistenta la peniciline.


2. Teste realizate in cadrul Laboratorului Infectii Nosocomiale si Rezistenta la Antibiotice:



Nr.crt.

Test

Precizari

1

Izolare/Identificare/Confirmare Staphylococcus aureus din prelevate biologice prin metoda bacteriologica clasica

Descriere: Izolarea si identificarea biochimica a speciei S.aureus (metoda clasica – medii diferentiale si pentru identificare biochimica);

Proba: Prelevat biologic din situsul anatomic infectat: prelevate normal sterile; prelevate normal moderat contaminate; prelevate normal intens contaminate.

Cantitatea: pe tampon pentru colectii deschise, 5g pentru materii fecale; minim 0,5ml pentru lichide si colectii inchise; min 10 ml sau 10g aliment;

Interval de transport: 1-3 zile

Timp eliberare rezultate: 3-5 zile

2

Izolare/Identificare/Confirmare stafilococi coagulaza negativi din prelevate biologice prin metoda bacteriologica clasica

Descriere:Izolarea si identificarea biochimica a speciilor si subspeciilor de stafilococ (metoda clasica – medii diferentiale si pentru identificare biochimica);

Proba:Prelevat biologic din situsul anatomic infectat: prelevate normal sterile; prelevate normal moderat contaminate; prelevate normal intens contaminate.

Cantitatea:pe tampon pentru colectii deschise, 5g pentru materii fecale; minim 0,5ml pentru lichide si colectii inchise; min 10 ml sau 10g aliment;

Interval de transport: 1-3 zile

Timp eliberare rezultate: 3 – 5 zile

3

Identificare tulpini Gram pozitive prin metode rapide – Vitek 2

Descriere: Izolarea si identificarea biochimica a speciilor si subspeciilor de bacterii Gram pozitive;

Proba: tulpina izolata din prelevate biologice

Cantitatea: cultura pe geloza nutritiva in panta

Interval de transport: 1-3 zile

Timp eliberare rezultate: 1 – 2 zile

4

Identificare tulpini Staphylococcus spp. prin metode rapide – galerii API Staph

Descriere: Izolarea si identificarea biochimica a speciilor de stafilococ

Proba: tulpina izolata din prelevate biologice

Cantitatea: cultura pe geloza nutritiva in panta

Interval de transport: 1-3 zile

Timp eliberare rezultate: 2-3 zile

5

Determinarea semicantitativa a sensibilitatii la antibiotice a tulpinilor de Staphylococcus spp. prin metoda difuzimetrica

Descriere: determinarea sensibilitatii la antibiotice a Staphylococcus spp. prin metoda disc difuziei

Proba: tulpina izolata din prelevate biologice

Cantitatea: cultura pe geloza nutritiva in panta

Interval de transport: 1- 3 zile

Timp eliberare rezultate: 3 zile

6

Determinarea cantitativa a sensibilitatii la un antibiotic a unei tulpini de Staphylococcus spp. prin metoda dilutiilor in agar

Descriere: determinarea sensibilitatii la antibiotice a Staphylococcus spp. prin metoda dilutiilor in agar (CMI)

Proba: tulpina izolata din prelevate biologice

Cantitatea: cultura pe geloza nutritiva in panta

Interval de transport: 1- 3 zile

Timp eliberare rezultate: 7 zile

7

Determinarea cantitativa a sensibilitatii la un antibiotic a unei tulpini de Staphylococcus spp. prin metoda E-test

Descriere: determinarea sensibilitatii la antibiotice a Staphylococcus spp. prin metoda E-test

Proba: tulpina izolata din prelevate biologice

Cantitatea: cultura pe geloza nutritiva in panta

Interval de transport: 1- 3 zile

Timp eliberare rezultate: 3 zile

8

Determinarea cantitativa a sensibilitatii la antibiotice a unei tulpini Gram pozitive prin metode rapide – Vitek 2

Descriere: determinarea sensibilitatii la antibiotice a unei tulpini Gram pozitive utilizand Vitek 2

Proba: tulpina izolata din prelevate biologice

Cantitatea: cultura pe geloza nutritiva in panta

Interval de transport: 1- 3 zile

Timp eliberare rezultate: 1 -2 zile

9

Determinarea lizotipului S.aureus prin metoda tipizarii bacteriofagice

Descriere: Determinarea lizotipului la bacteriofagi in scopuri epidemiologice

Proba: tulpina izolata din prelevate biologice

Cantitatea: cultura pe geloza nutritiva in panta

Interval de transport: 1- 3 zile

Timp eliberare rezultate: 7 zile

10

Determinarea prezentei termonucleazei in mediul de cultura, hemoculturi si alimente prin metoda godeurilor in agar

Descriere: Evidentierea prezentei termonucleazei consituie o dovada a multiplicarii S.aureus in materialul testat

Proba: cultura in mediu nutritiv solid sau lichid, lichid de hemocultura sau aliment

Cantitatea: 1ml lichid  sau cultura pe geloza nutritiva

Interval de transport: rapid pentru lichide sau 1-3 zile pentru cultura pe geloza nutritiva

Timp eliberare rezultate: 2 zile

11

Detectarea rezistentei la meticilina a stafilococilor prin PCR (mecA)

Descriere: Detectarea genei mecA – “gold standard” pentru identificarea MRSA

Proba: tulpina izolata din prelevate biologice

Cantitatea: cultura pe geloza nutritiva in panta

Interval de transport: 1- 3 zile

Timp eliberare rezultate: 2 zile

12

Izolare/Identificare/Confirmare Pseudomonas aeruginosa – tulpini cromogene si pseudomonade fluorescente (Pseudomonas fluorescens si Pseudomonas putida) prin metoda bacteriologica clasica

Descriere: Izolarea si identificarea pe baza caracterelor de cultivare, enzimatice si biochimice (metoda clasica – medii diferentiale si identificare biochimica)

Proba: prelevat biologic din situsul anatomic infectat; prelevate normal sterile; prelevate normal moderat contaminate; prelevate normal intens contaminate; tulpina izolata din prelevate patologice

Cantitatea: pe tampon pentru colectii deschise; min. 0,5ml pentru lichide si colectii inchise sau cultura pe geloza nutritiva (in panta)

Interval de transport: 1-3 zile

Timp eliberare rezultate: 5 zile

13

Izolare/Identificare/Confirmare Pseudomonas aeruginosa acromogen, Pseudomonas spp., Burkholderia spp., Stenotrophomonas maltophilia prin metoda bacteriologica clasica

Descriere: Izolarea si identificarea pe baza caracterelor de cultivare, enzimatice si biochimice (metoda clasica – medii diferentiale si identificare biochimica)

Proba: prelevat biologic din situsul anatomic infectat; prelevate normal sterile; prelevate normal moderat contaminate; prelevate normal intens contaminate; tulpina izolata din prelevate patologice

Cantitatea: pe tampon pentru colectii deschise; min. 0,5ml pentru lichide si colectii inchise sau cultura pe geloza nutritiva (in panta)

Interval de transport: 1- 3 zile

Timp eliberare rezultate: 5 zile

14

Izolare/identificare/Confirmare Burkholderia pseudomallei

Descriere: Izolarea si identificarea pe baza caracterelor de cultivare, enzimatice si biochimice (metoda clasica – medii diferentiale si identificare biochimica)

Proba: prelevat biologic din situsul anatomic infectat; prelevate normal sterile; prelevate normal moderat contaminate; prelevate normal intens contaminate; tulpina izolata din prelevate patologice

Cantitatea: pe tampon pentru colectii deschise; min. 0,5ml pentru lichide si colectii inchise sau cultura pe geloza nutritiva (in panta)

Interval de transport: 1- 3 zile

Timp eliberare rezultate: 5 zile

15

Izolare/identificare/Confirmare Burkholderia cepacia complex

Descriere: Izolarea si identificarea pe baza caracterelor de cultivare, enzimatice si biochimice (metoda clasica – medii diferentiale si identificare biochimica)

Proba: prelevat biologic din situsul anatomic infectat; prelevate normal sterile; prelevate normal moderat contaminate; prelevate normal intens contaminate; tulpina izolata din prelevate patologice

Cantitatea: pe tampon pentru colectii deschise; min. 0,5ml pentru lichide si colectii inchise sau cultura pe geloza nutritiva in panta

Interval de transport: 1- 3 zile

Timp eliberare rezultate: 5 zile

16

Izolare/identificare/Confirmare Pseudomonas aeruginosa acromogen, Pseudomonas spp., Burkholderia spp., Stenotrophomonas maltophilia, Acinetobacter spp.  prin metode rapide – galerie API 20 NE

Descriere: Izolarea si identificarea pe baza caracterelor de cultivare, enzimatice si biochimice (metoda clasica – medii diferentiale si identificare biochimica)

Proba: prelevat biologic din situsul anatomic infectat; prelevate normal sterile; prelevate normal moderat contaminate; prelevate normal intens contaminate; tulpina izolata din prelevate patologice

Cantitatea: pe tampon pentru colectii deschise; min. 0,5ml pentru lichide si colectii inchise sau cultura pe geloza nutritiva in panta

Interval de transport: 1- 3 zile

Timp eliberare rezultate: 3 zile

17

Izolare/Identificare/Confirmare tulpini Gram negative prin metode rapide – Vitek 2

Descriere: Izolarea si identificarea pe baza caracterelor de cultivare, enzimatice si biochimice (metoda clasica – medii diferentiale si identificare biochimica)

Proba: prelevat biologic din situsul anatomic infectat; prelevate normal sterile; prelevate normal moderat contaminate; prelevate normal intens contaminate; tulpina izolata din prelevate patologice

Cantitatea: pe tampon pentru colectii deschise; min. 0,5ml pentru lichide si colectii inchise sau cultura pe geloza nutritiva in panta

Interval de transport: 1- 3 zile

Timp eliberare rezultate: 1-2 zile

18

Determinarea virulentei tulpinilor P.aeruginosa prin metoda “in vitro”

Descriere: teste de virulenta: producerea de proteaze (gelatinaza), producerea de DNA-za, evidentierea lipazelor (hemolizina)

Proba: tulpina izolata din prelevate patologice

Cantitatea: cultura pe geloza nutritiva in panta

Interval de transport: 1- 3 zile

Timp eliberare rezultate: 3- 5zile

19

Determinarea lizotipului Pseudomonas aeruginosa prin metoda tipizarii bacteriofagice

Descriere: determinarea sensibilitatii la bacteriofagi a tulpinilor de P. aeruginosa

Proba: tulpina izolata din prelevate patologice

Cantitatea: cultura pe geloza nutritiva in panta

Interval de transport: 1- 3 zile

Timp eliberare rezultate: 3 zile

20

Determinarea serotipului tulpinilor de Pseudomonas aeruginosa

Descriere: determinarea serotipului tulpinilor de P.aeruginosa

Proba: tulpina izolata din prelevate patologice

Cantitatea: cultura pe geloza nutritiva in panta

Interval de transport: 1- 3 zile

Timp eliberare rezultate: 5 -7 zile

21

Determinarea semicantitativa a sensibilitatii la antibiotice a tulpinilor de Pseudomonas spp., Burkholderia spp., Stenotrophomonas maltophilia prin metoda difuzimetrica

Descriere: determinarea sensibilitatii la antibiotice  prin metoda difuzimetrica

Proba: tulpina izolata din prelevate patologice

Cantitatea: cultura pe geloza nutritiva in panta

Interval de transport: 1- 3 zile

Timp eliberare rezultate: 3 zile

22

Determinarea semicantitativa a sensibilitatii la antibiotice a tulpinilor de Acinetobacter spp. prin metoda difuzimetrica

Descriere: determinarea sensibilitatii la antibiotice a tulpinilor de Acinetobacter spp. prin metoda difuzimetrica

Proba: tulpina izolata din prelevate patologice

Cantitatea: cultura pe geloza nutritiva in panta

Interval de transport: 1- 3 zile

Timp eliberare rezultate: 3 zile

23.

Determinarea cantitativa a sensibilitatii la antibiotice a tulpinilor Gram negative prin metoda automata – Vitek 2

Descriere: determinarea sensibilitatii la antibiotice a unei tulpini Gram negative utilizand Vitek 2

Proba: tulpina izolata din prelevate biologice

Cantitatea: cultura pe geloza nutritiva in panta

Interval de transport: 1- 3 zile

Timp eliberare rezultate: 1 -2 zile






2. Baza tehnica de care dispune laboratorul Infectii Nosocomiale si Rezistenta la Antibiotice:


- link -


Nr. crt.

Denumire

Firma producatoare

Clasa de  precizie / domeniu de masurare

Speed-vac DNA 110

Termo


Sistem de secventiere automata a acizilor nucleici ABI PRISM 3100 AVANT

Applied Biosystems

Echipament portabil cu 4 capilare, laser argon (clasa 3B), temp. optima de lucru 15-30°C.

Termocycler AmpGene PCR System 2100

Applied Biosystem


Spectrofotometru

Libra S32


Sistem electroforeza Chef Mapper

Bio-Rad

a. Sursa de alimentare de max. 350 V, cu reglaj continuu. Curent max livrat de sursa 0,5 A. Campul electric se modifica sub unghiuri cuprinse intre 0˚ si 360˚ in functie de polaritatea electrozilor. Interval de puls: 50ms-18h b.Sistem de racire: 5˚- 25˚ C c. Viteza de circulatie lichid 1l / min.

Baie de apa cu circulare

Jouan

10-100˚C

Centrifuga PRECISION DURAFUGE 300, model 51231101

JOUAN IND.S.A.S., Franta

300-6000 rpm

Centrifuga cu racire, model BR4

Jouan

4000 -14000rpm

Minicentrifuga

Cole Parmer


Sistem fotografic pentru geluri DigiDoc

Bio-Rad

Aparat foto digital Panasonic DMC-LC4; Card memorie 16 M. Masa UV 100/230 V AC, 50-60Hz, 6x302nm – 8W. Sistem PC – Dell

Sistem VITEK 2

BIOMERIEUX, Franta


Aparat OSIRIS (computer+ imprimanta+cititor)

BioRad


Microscop optic

Micros Austria


Numarator colonii

IUL Instruments


Densimat, model M007230

BIOMERIEUX, Franta

0,5 – 7,5 Mc Farland

Densimat, model M007230

BIOMERIEUX, Franta

0,5 – 7,5 Mc Farland

Densimat, model M007230

BIOMERIEUX, Franta

0,5 – 7,5 Mc Farland

Frigider

FIOCCHETTI

Temperatura medie frigider +5˚C, congelator -18˚C , 500 l

Frigider KF35

ARCTIC, Romania

Temperatura medie frigider +5˚C, congelator -18˚C, 280 l

Frigider KF35

ARCTIC, Romania

Temperatura medie frigider +5˚C, congelator -18˚C, 280 l

Baie de apa


Memmert

Max. 95˚C

Repartizor lichide

BIOHIT PROLINE

5-50 ml

Repartizor lichide

BIOHIT PROLINE

5-50 ml

Pipeta automata volume mari

BIOHIT

1-100 ml

Pipeta automata volume mari

BIOHIT

1-100 ml

Balanta analitica

Mettler Toledo

0,02g-200g

Dispenser antibiotice

OXOID

6 cartuse

Dispenser antibiotice

OXOID

8 cartuse

Dispenser antibiotice

OXOID

8 cartuse

Dispenser antibiotice

OXOID

8 cartuse

Dispenser antibiotice

OXOID

8 cartuse

Dispenser antibiotice

OXOID

8 cartuse

Dispenser antibiotice

OXOID

8 cartuse

Dispenser antibiotice

OXOID

8 cartuse

Computer  ATRONIC PENTIUM IV



Computer INTEL PENTIUM IV



Computer PENTIUM IV



Imprimanta HP LJ 1160

HP


Imprimanta HP LJ 2820

Hewlet Packard


Imprimanta HP LJ 2600 N

Hewlet Packard


Pipetor

DELTALAB

2ml

Pipetor

DELTALAB

10 ml

Pipetor

DELTALAB

25 ml

Laminar flow cabinet – MSC 12


JOUAN, France

Class II

Laminar flow cabinet – model BHA/BHA-M


BIOHAZARD, Italia


Congelator MODEL VXS 490

JOUAN, France

Pana la -86˚C

Incubator digital display Model EB2-118 INNOVENS


Jouan, Franta

100 l

Incubator cooled, Model ES 110


Nuve

100 l

Pipeta automata

HIRSCHMANN LABORGERATE, Germania

20-200µl

Pipeta automata

HTL

20-200µl

Pipeta automata

HTL

20-200µl

Vortex

Karl Hecht

KG-Assistent

1-2800 rpm ; 0-60 minute

Vortex, model  L46

Labinco


Vortex, model  L46

Labinco


Bio Vortex

Biosan


pHmetru

WTW Wissenschaftlich


Pipeta automata – Research 8 canale

Eppendorf

0,5-10µl

Pipeta automata

Biohit

500-5000µl

Pipeta automata

Biohit

10-100µl

Pipeta automata

Biohit

0,1-2,5µl

Pipeta automata

Biohit

0,5-10µl

Pipeta automata

Biohit

100-1000µl

Pipeta automata

Biohit

500-5000µl

Pipeta automata

Biohit

10-100µl

Pipeta automata

Biohit

0,1-2,5µl

Pipeta automata

Biohit

0,5-10µl

Pipeta automata

Biohit

100-1000µl

Pipeta automata

Biohit

100-1000µl

Pipeta automata

Biohit

0,5-10µl

Pipeta automata

Biohit

10-100µl

Pipeta automata

Biohit

0,1-2,5µl

Pipeta automata

Biohit

500-5000µl

Agitator magnetic, model MR 3001K

Heidolph


Aplicator bacteriofagi

Leec

27 anse

Pipeta automata – Research

Eppendorf

100-1000µl

Pipeta automata – Research

Eppendorf

20-200µl

Pipeta automata – Research

Eppendorf

2-20µl




Sef laborator Infectii Nosocomiale si Rezistenta la Antibiotice,

Conf. Univ. Dr. Irina Codita